D. Yu. Ryazantsev, E. M. Chudinov, L. Yu. Kokaeva, S.N. Elansky, P.N. Balabko, G.L. Belova, S.K. Zavriev
የ phytopathogenic ፈንገስ Colletotrichum coccodes በድንች እና ቲማቲሞች ውስጥ አንትራክኖዝ እና ጥቁር የሳንባ ነቀርሳ በመባል የሚታወቁ አደገኛ በሽታዎችን ያስከትላል። በስነ-ቁምፊ ባህሪያት ብዙውን ጊዜ በሌሎች ረቂቅ ተሕዋስያን ምክንያት ከሚመጡ በሽታዎች ለመለየት አስቸጋሪ ናቸው; በአረንጓዴ የቲማቲም ፍራፍሬዎች ላይ በሽታው ምንም ምልክት የሌለው ሊሆን ይችላል, እራሱን በደረቁ ቀይ ፍራፍሬዎች ላይ ብቻ ያሳያል. ለበሽታ አምጪ ተህዋሲያን ፈጣን እና ትክክለኛ ምርመራ ፣ የእውነተኛ ጊዜ PCR የሙከራ ስርዓት ቀርቧል። የሙከራ ስርዓትን ለማዳበር የ 45 C. የኮኮድስ ዝርያዎች የ glycerol triphosphate dehydrogenase ጂን ኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተል በተለያዩ የሩሲያ ክልሎች ውስጥ ከድንች እጢዎች ተለይቷል ።
በጄንባንክ ዳታቤዝ ውስጥ የሚገኙትን የሌሎች ዝርያዎች ተመሳሳይ ቅደም ተከተሎች በተገኘው ውጤት እና በመተንተን፣ ዝርያ-ተኮር ፕሪመርሮች እና ለ C.cocodes መፈተሻ ተዘጋጅተዋል። የተፈጠረውን የፍተሻ ስርዓት ምንነት ለማወቅ PCR ከቲማቲም እና ድንች ተክሎች (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis phaseoli, Alternaria alternata, Helminthosporium solani) ጋር በተያያዙ 15 የተለያዩ ጥገኛ እና ሳፕሮሮፊክ ፈንገሶች ከንጹህ ባህሎች በዲ ኤን ኤ ተከናውኗል. , Colletotrichum coccodes Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. cladosporioides). የ Colletotrichum coccodes ዲ ኤን ኤ መገኘት የሚወሰነው በ 20-27 የመነሻ ዑደት ነው, ሌሎች ዝርያዎች ደግሞ ከ 40 ዑደቶች በኋላ ተገኝተዋል ወይም አልተገኙም. የሙከራ ስርዓቱ በተተነተነው PCR ድብልቅ ውስጥ ከ 0.01 ng/mm3 በላይ የC.cocodes የDNA ውህዶችን በአስተማማኝ ሁኔታ ለማወቅ ያስችላል። የተገነባውን የሙከራ ስርዓት በመጠቀም በቲማቲም ቅጠሎች ውስጥ የፈንገስ በሽታዎች ምልክቶች እና የድንች እጢዎች የበሽታው ውጫዊ ምልክቶች ሳይታዩ በቲማቲም ቅጠሎች ውስጥ የሲ. የፈንገስ ኢንፌክሽን ምልክቶች ያላቸው ቅጠሎች በ Krasnodar Territory, ሀረጎችና - በኮስትሮማ, ሞስኮ, ካሉጋ, ኒዝሂ ኖቭጎሮድ ክልሎች ውስጥ ከሚገኙት መስኮች ከሁለት የተለያዩ መስኮች ተሰብስበዋል. በ Krasnodar Territory ውስጥ C. coccodes ዲ ኤን ኤ የያዘ አንድ የቲማቲም ቅጠል ተገኝቷል; የዚህ በሽታ አምጪ ተህዋሲያን ከፍተኛ የዲ ኤን ኤ መገኘት በኮስትሮማ ፣ ሞስኮ ፣ ካሉጋ ክልሎች ውስጥ በሚበቅሉ 5 የሳንባ ነቀርሳ ናሙናዎች ውስጥ ተገኝቷል ።
መግቢያ
የ ጂነስ Colletotricum እንጉዳይ እህሎች, አትክልቶች, ዕፅዋት, ለብዙ ዓመታት ፍሬ እና የቤሪ ተክሎች ላይ ተጽዕኖ አደገኛ phytopathogens ናቸው. የዚህ ዝርያ በሁሉም ቦታ ከሚገኙት አንዱ የሆነው ኮሌቶትሪኩም ኮከድስ (ዋልር) ነው።
ሂዩዝ፣ የአንትሮክኖዝ መንስኤ እና የድንች እና የቲማቲም ጥቁር ቦታ መንስኤ ነው፣ እና ሌሎች የ Solanaceae ቤተሰብ እፅዋትን ጨምሮ በሽታዎችን ያስከትላል። አረም (ዲላርድ, 1992). ሐ. ኮከዶች የዕፅዋቱን ሁሉንም የመሬት ውስጥ ክፍሎች፣ ግንድ መሠረቶች፣ ቅጠሎች እና ፍራፍሬዎች ይነካል (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994)። በተበከሉት የድንች እጢዎች ቅርፊት ላይ ግራጫማ ቦታዎችን በማይታወቅ ሁኔታ ግልጽ ባልሆኑ ጠርዝዎች መገንባት ይታያል ፣ በዚህ ላይ ጥቁር ነጠብጣቦች እና ስፖሮሲስ እና ማይክሮስክለሮቲስ በግልጽ ይታያሉ። በማከማቻ ጊዜ ለስላሳ ይዘት ያላቸው ቁስሎች በሳንባ ነቀርሳ ውስጥ ሊፈጠሩ ይችላሉ, ማለትም. በሽታው ወደ አንትራክኖስ ደረጃ ውስጥ ይገባል, ሆኖም ግን, እጅግ በጣም አናሳ ነው.
በተመሳሳይ ጊዜ, የአንታሮሲስ (የቆዳ ቁስለት በትንሽ ጥቁር ነጠብጣቦች) ምልክቶች የቲማቲም ፍሬዎች የተለመዱ ናቸው. በቅጠሎች ላይ የ C. coccodes ምልክቶች እንደ ጥቁር ቡናማ ነጠብጣቦች ይታያሉ, ብዙውን ጊዜ በቢጫ ቲሹ (ጆንሰን, 1994) የተከበበ ነው.
በሳንባ ነቀርሳ ላይ የጥቁር ነጠብጣቦች እድገት መልካቸውን ያበላሻል ፣ በተለይም የታጠበ ቀይ-ልጣጭ ድንች በሚሸጥበት ጊዜ ይገለጻል ። የልጣጭ ማድረቅ ወደ ከመጠን በላይ ትነት እና የማከማቻ ኪሳራ ይጨምራል (ረሃብ እና ማክንታይር ፣ 1979)። በሌሎች የዕፅዋት አካላት ላይ የሚደርስ ጉዳት ወደ ምርት ማጣት ይመራል፣ ይህም በሁለቱም ክፍት እና ዝግ መሬት (ጆንሰን፣ 1994፣ ትሮር እና ሌሎች፣ 1999) ተጠቅሷል። በሲ ኮክዴድ ምክንያት የሚመጡ በሽታዎች ሩሲያን ጨምሮ በሁሉም የድንች አምራች ክልሎች ውስጥ የተለመዱ ናቸው (ሊሳ, ሂልተን, 2003; ቤሎቭ እና ሌሎች, 2018). በ C. coccodes ላይ ያሉት ፀረ-ፈንገስ መድኃኒቶች በቂ ብቃት ባለመኖሩ እና ተከላካይ ዝርያዎች ባለመኖራቸው የእነዚህን በሽታዎች መቆጣጠር አስቸጋሪ ነው (Read, Hide, 1995).
የ C. coccodes inoculum በዘር ቱቦዎች ውስጥ ሊቆይ ይችላል (አንብብ, ደብቅ, 1988; ጆንሰን እና ሌሎች, 1997), የቲማቲም ዘሮች (ቤን-ዳንኤል እና ሌሎች, 2010), በአፈር ውስጥ, በእፅዋት ፍርስራሾች ላይ ለረጅም ጊዜ ይተርፋሉ. (ዲላርድ, 1990; ዲላርድ, ኮብ, 1993) እና በአረም ውስጥ (Raid, Pennypacker, 1987). የበርካታ ደራሲያን ስራዎች (አንብብ, ደብቅ, 1988; ባርክዶል, ዴቪስ, 1992; ጆንሰን እና ሌሎች, 1997; Dillard, Cobb, 1993) በድንች እና ቲማቲም ውስጥ የበሽታው እድገት በአብዛኛው የተመካው በመገኘቱ ላይ ነው. በዘር እና በአፈር ውስጥ የኢንኩሉም. ስለዚህ የበሽታውን ኪሳራ ለመቀነስ በዘር ቁሳቁስ ፣ በአፈር ውስጥ ፣ በዘሩ ውስጥ የድንች ሀረጎችና የቲማቲም ዘሮች ለማከማቸት የፈንገስ ፕሮፓጋንዳዎችን (ቁጥርን ጨምሮ) መመርመር አስፈላጊ ነው ። በአፈር ውስጥ እና በእጽዋት ቁሳቁስ ውስጥ ያሉ ሞርፎሎጂያዊ ምርመራዎች ሊደረጉ የሚችሉት በማይክሮስክሌሮቲያ መገኘት ብቻ ነው, ሆኖም ግን, በሌሎች የፈንገስ ዓይነቶች ውስጥም ይገኛሉ.
በሳንባ ነቀርሳ ላይ ያሉት ምልክቶች በሄልሚንቶስፖሪየም ሶላኒ ፈንገስ ምክንያት ከሚመጣው የብር ቅርፊት ጋር በጣም ተመሳሳይ ናቸው. የኮሌቶትሪም ኮክዲስ እና ሄልሚንቶስፖሪየም ሶላኒን ወደ ንፁህ ባህል ማግለል በጣም ከባድ እና ረጅም ጊዜ የሚፈጅ ነው ምክንያቱም በንጥረ-ምግብ መካከለኛ እድገት ምክንያት። ኮሌቶትሪም ኮክዶችን በፍጥነት ለመለየት በመሳሪያዎች የመመርመሪያ ዘዴዎችን መጠቀም አስፈላጊ ነው. በጣም ምቹ ዘዴ የ polymerase chain reaction (PCR) እና ማሻሻያው - የእውነተኛ ጊዜ PCR ነው. በአሁኑ ጊዜ በእንግሊዝ ተመራማሪዎች (Cullen et al., 2002) ለ ITS1 የ rDNA ክልል የፈተና ስርዓት በአውሮፓ እና በዩናይትድ ስቴትስ ውስጥ ጥቅም ላይ ይውላል. አጠቃቀሙ ጥሩ ውጤት አሳይቷል የሩሲያ ገለልተኝነቶች ትንተና (Belov et al, 2018). ይሁን እንጂ ሲ.ኮኮዶች በጣም ተለዋዋጭ ናቸው እና ከአንድ የዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተል መለየት የውሸት አሉታዊ ውጤቶችን ሊያስከትል ይችላል. ለበለጠ አስተማማኝ ምርመራ, በርካታ ዝርያዎች-ተኮር የዲ ኤን ኤ ቅደም ተከተሎችን መተንተን አስፈላጊ ነው, ከዚህ ጋር ተያይዞ የ C. coccodes በ glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ጂን ቅደም ተከተል ለመለየት የሚያስችል ኦሪጅናል የሙከራ ስርዓት አዘጋጅተናል.
ቁስአካላት እና መንገዶች
የተፈጠሩትን የሙከራ ስርዓቶች ውጤታማነት እና ልዩነት ለመገምገም 15 የፈንገስ ዝርያዎች ንጹህ ባህሎችን እንጠቀማለን, ከተጎዱት የቲማቲም ቅጠሎች እና ፍራፍሬዎች, የድንች እጢዎች (ሠንጠረዥ 1). ለየብቻ የፈንገስ ኢንፌክሽን ምልክቶች ያላቸውን የእፅዋት አካላትን ወስደናል፣ በየቁጥቋጦው ከአንድ በላይ አካል የለም።
አንድ የቲቢ ቁራጭ ከቆዳ ጋር ፣ የቲማቲም ፍሬ እና የተጎዳ ቅጠል በቢኖኩላር ማይክሮስኮፕ ውስጥ እንዲቀመጥ ተደርጓል ፣ ከዚያ በኋላ ማይሲሊየም ፣ ስፖሬስ ወይም ቁራጭ ቲሹ ወደ አጋር ሚዲያ (wort agar) ይተላለፋል። የፔትሪ ምግብ በሹል በተሰየመ ዲስሴክሽን መርፌ። በሙከራ ቱቦዎች ውስጥ በ 4 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ በ agar slant ላይ ተከማችተዋል.
ለመተንተን የታቀዱ የፈንገስ በሽታዎች ምልክቶች ያላቸው የቲማቲም ቅጠሎች ወዲያውኑ ከተሰበሰቡ በኋላ (በሜዳው ላይ) በ 70% ኤቲል አልኮሆል ውስጥ እስከ ዲ ኤን ኤ እስኪገለሉ ድረስ ተከማችተዋል. የድንች ቱቦዎች ወደ ላቦራቶሪ ተወስደዋል, ከነሱ (2 × 1 ሴ.ሜ ቁራጭ) ተላጡ እና በ -20 ° ሴ. ዲኤንኤ እስኪገለል ድረስ እንደቀዘቀዘ ተከማችቷል።
ለዲኤንኤ ማግለል ንጹህ የፈንገስ ባህሎች በፈሳሽ አተር ውስጥ ይበቅላሉ። የፈንገስ ማይሲሊየም ከፈሳሹ መካከለኛ ተወግዷል ፣ በማጣሪያ ወረቀት ላይ የደረቀ ፣ በፈሳሽ ናይትሮጂን ውስጥ የቀዘቀዘ ፣ ተመሳሳይነት ያለው ፣ በ CTAB ቋት ውስጥ የተከተተ ፣ በክሎሮፎርም የተጣራ ፣ በአይሶፕሮፓኖል እና በ 0.5 ሜ ፖታስየም አሲቴት ድብልቅ የተስተካከለ ፣ ሁለት ጊዜ በ 2% ታጥቧል። አልኮል. የተገኘው ዲ ኤን ኤ በተቀላቀለ ውሃ ውስጥ ይሟሟል እና በ -70 ° ሴ (ኩቱዞቫ እና ሌሎች, 20) ውስጥ ተከማችቷል. የዲኤንኤ ትኩረት የሚለካው በ HS ዲኤንኤ መመዘኛ ኪት በመጠቀም በ Qubit 2017 (Qiagen, Germany) ላይ ባለ ድርብ ገመድ ላለው ዲኤንኤ ነው። የአልኮሆል እና የቀዘቀዙ ናሙናዎች በፈሳሽ ናይትሮጅን ውስጥ ተካሂደዋል, ከዚያም የዲ ኤን ኤ ማውጣት ከላይ እንደተገለፀው (ለማይሲሊየም ንጹህ የፈንገስ ባህሎች) ተካሂዷል.
ሠንጠረዥ 1. በስራው ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውሉ የፈንገስ ዝርያዎች አመጣጥ
የእንጉዳይ ስም | ተክል, አካል | የተመረጠ ቦታ |
---|---|---|
ኮሌቶትሪችም ኮከዴስ 1፣ ሲ. ኮኮደስ 2፣ ሲ. ኮኮዴስ 3፣ ኢሊዮኔክትሪያ ክራስሳ፣ ራይዞክቶኒያ ሶላኒ | የድንች እጢ | Kostroma ክልል, የ 1 ኛ መስክ ትውልድ ድንች ሀረጎችና, cultivar Red Scarlett |
ኮሌቶትሪክስ ኮከድስ 4 | የድንች ቅጠል | ሪፐብሊክ ማሪ ኤል ፣ ዮሽካር-ኦላ |
ሄልሚንቶስፖሪየም ሶላኒ | የድንች እጢ | የማጋዳን ክልል ፣ ፖ. ድንኳን, የድንች እጢ |
ክላዶስፖሪየም ፉልቪም | የቲማቲም ቅጠል | የሞስኮ ክልል, ትልቅ-ፍራፍሬ ቲማቲም |
Alternaria tomatophila | የቲማቲም ፍሬ | በሁሉም የሩሲያ የምርምር ተቋም የእፅዋት ጥበቃ ማይኮሎጂ እና ፋይቶፓቶሎጂ ላብራቶሪ ሠራተኞች ተላልፈዋል። |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp. | የቲማቲም ፍሬ | ክራስኖዶር ግዛት, ክራይሚያ ወረዳ, ግሬድ ክሬም |
Fusarium oxysporum | የስንዴ ሥር | የሞስኮ ክልል |
PCR በ DTprime ማጉያ (ዲ ኤን ኤ-ቴክኖሎጂ) ላይ ተካሂዷል. ለ PCR፣ ኦሪጅናል ፕሪመርሮች እና ለግሊሰሮል ትራይፎስፌት ዲሃይድሮጅንሴዝ ጂን ዝርያ-ተኮር ክልል መፈተሻ ጥቅም ላይ ውለው ነበር፡ ወደፊት primer Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA፣ በግልባጭ ፕሪመር Coc280gdr - TACTTTGAGCATGTAGGCCTGGGT1 - FACTGTGTTG213 ፕሮፖጋንዳ። ፕሪመርዎቹ XNUMX ቢፒፒ ክልልን ያጎላሉ።
ምላሹ 50 ng የጠቅላላ ዲኤንኤ (ቅጠሎችን እና ሀረጎችን ሲተነተን) እና 10 ng (ከንጹህ የፈንገስ ባህሎች ዲ ኤን ኤ ሲተነተን) ወስዷል። የምላሽ ድብልቅ (35 μl) በፓራፊን ንብርብር በሁለት ክፍሎች ተከፍሏል: የታችኛው (20 μl) 2 μl 10 × ምላሽ ሰጭ (750 ሚሜ Tris-HCl, pH 8.8; 200 mM (NH4) 2SO4; 25 ይዟል. mM MgCl2; 0.1% Tween-20), 0.5 ሚሜ የእያንዳንዱ ዲኦክሲኑክሊዮታይድ ትራይፎስፌት, 7 pmol የእያንዳንዱ ፕሪመር እና 4 pmol የሃይድሮሊዝድ ፍሎረሰንት መፈተሻ; የላይኛው 1 μl 10 × PCR ቋት እና 1 U of Taq polymerase ይዟል።
ድብልቁን ከፓራፊን ጋር መለየት ቧንቧዎቹ ለረጅም ጊዜ በ 5 ° ሴ የሙቀት መጠን እንዲቀመጡ እና ለ PCR ከ 10 ዲግሪ ሴንቲግሬድ በላይ በሆነ የሙቀት መጠን ለ 80 ደቂቃዎች ካሞቁ በኋላ ትኩስ ጅምርን ለማቅረብ ያስችላል. PCR የሚከናወነው በሚከተለው መርሃ ግብር መሰረት ነው: 94.0 ° C - 90 s (1 ዑደት); 94.0 ° ሴ - 30 ሴ. 64.0 ° ሴ - 15 ሰ (5 ዑደቶች); 94.0 ° ሴ - 10 ሴ. 64.0 ° ሴ - 15 ሰ (45 ዑደቶች); 10.0 ° ሴ - ማከማቻ.
ውጤቶች እና ውይይት
የ glycerol triphosphate dehydrogenase ዘረ-መል (ጅን) ቅደም ተከተሎች ከቅጠሎች, ከግንድ, ከድንች እጢዎች እና ከቲማቲም ፍራፍሬዎች (Kutuzova, 45) በተለዩ 2018 ዝርያዎች ውስጥ በተለያዩ የሩሲያ ክልሎች ተወስነዋል. የሁሉም የዝርያዎች ቅደም ተከተሎች በሁለት ኑክሊዮታይድ የሚለያዩ በ 2 ቡድኖች ተከፍለዋል. በ KY496634 እና KY496635 ቁጥሮች ስር ያሉት የሁለቱም ቡድኖች ተወካዮች የኑክሊዮታይድ ቅደም ተከተሎች በ GenBank ውስጥ ተቀምጠዋል።
በመሠረታቸው ላይ የተነደፉት ፕሪመርስ coc70gdf፣ coc280gdr እና cocgdz መፈተሻ የBLAST ፕሮግራምን በመጠቀም ተረጋግጠዋል (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) በሁሉም የ glycerol triphosphate dehydrogenase ጂን የጂነስ ኮሌቶትሪክየም ዝርያ እና በጄንባንክ ዳታቤዝ ውስጥ በሚገኙ ሌሎች ፍጥረታት ላይ።
ከፕሪመር እና ከምርመራ ጋር ተመሳሳይነት ያላቸው የሌሎች ፍጥረታት ዲኤንኤ ክልሎች አልተገኙም።
የፈተና ስርዓቱ ትብነት የተለያየ መጠን ያለው ሲ.ኮኮድ ዲ ኤን ኤ፣ በአንትራክሲስ ከተያዘው የድንች ቅጠል የተገኘው ዲ ኤን ኤ (በ2017 በማሪ ኤል፣ የተለያዩ ቀይ ስካርሌት የተሰበሰበ) እና በጥቁር ቦታ የተጎዱትን የሳንባዎች ልጣጭ (የተሰበሰበ) በመጠቀም የፈተና ስርዓቱን ስሜት ማረጋገጥ ተችሏል። በ Kostroma ክልል, የተለያዩ ቀይ ስካርሌት, ሠንጠረዥ 2). በሳንባ ነቀርሳ እና ድንች ቅጠሎች ውስጥ የዲ ኤን ኤ መኖሩን ለማረጋገጥ, የሲ.
የፈተና ስርዓቱ የስሜታዊነት ትንተና ውጤቶች እንደሚያሳዩት በ PCR ድብልቅ ውስጥ ያለው አጠቃላይ ይዘት ከ 0.05 ng በላይ በሚሆንበት ጊዜ የ C. coccodes ዲ ኤን ኤ በአንድ ናሙና ውስጥ መኖሩን በተሳካ ሁኔታ ለመመርመር ያስችላል. አንድ ስክሌሮቲያ በአማካይ 0.131 ng ስላለው እና አንድ ስፖሬስ ወደ 0.04 NG ዲ ኤን ኤ ስለሚይዝ ይህ ለመለየት በቂ ነው (Cullen et al., 2002). በእንግሊዘኛ ቡድን የተገነባው የሙከራ ስርዓት (ኩለን እና ሌሎች, 2002) ተመሳሳይ ትብነት አሳይቷል (የገደብ ዑደት 34 በ 0.05 ng DNA እና 37 በ 0.005 ng).
በሁሉም ጉዳዮች ላይ ሲ. ኮክዶችን የያዙ የተፈጥሮ ናሙናዎች ትንተና በናሙናው ውስጥ መገኘቱን በአስተማማኝ ሁኔታ ለማሳየት አስችሏል (ሠንጠረዥ 2)። ለዲኤንኤ ማግለል የታቀደው ዘዴ የተፈጥሮ እፅዋትን ናሙናዎች ለመተንተንም ተግባራዊ ይሆናል.
ሠንጠረዥ 2. ለእውነተኛ ጊዜ PCR የ Colletotrichum coccodes ን ለመለየት የቀረበው የሙከራ ስርዓት ትብነት መወሰን
Образец | በናሙናው ውስጥ ያለው የዲ ኤን ኤ መጠን *, ng | የመነሻ ዑደት | C. cocodes ማወቂያ |
---|---|---|---|
Mycelium Colletotricum ኮኮዶች | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
የሳንባ ነቀርሳ ልጣጭ 1 | 50 | 32 | + |
የሳንባ ነቀርሳ ልጣጭ 2 | 50 | 30 | + |
የሳንባ ነቀርሳ ልጣጭ 3 | 50 | 31.5 | + |
የድንች ቅጠል | 50 | 29.5 | + |
ማስታወሻ. * በ PCR ምርቶች ድብልቅ ውስጥ.
የሙከራ ስርዓቱን ልዩነት መሞከር ከ 15 የፈንገስ ዝርያዎች በተወሰዱ የዲኤንኤ ናሙናዎች ላይ ተካሂዷል. ሁሉም የፈንገስ ዓይነቶች በፀሐፊዎቹ ከተጠቁ እና ጤናማ ፍራፍሬዎች እና የቲማቲም ቅጠሎች, ድንች ድንች; አንድ ዝርያ ከስንዴ ሥር ተለይቷል (ሠንጠረዥ 1). ከፍሬው ወለል ላይ ከሚገኙት ውስጥ, ለቲማቲም በሽታ አምጪ ያልሆኑ ዝርያዎችም አሉ (ለምሳሌ, Phellinus ferrugineovelutinus).
ጥናቶች እንደሚያሳዩት C.coccodes ዲ ኤን ኤ በ 20-27 የመግቢያ ዑደት ላይ ተገኝቷል, ሌሎች የፈንገስ ዝርያዎች ግን አልተገኙም ወይም ከዑደት 40 በኋላ ምልክት አልተሰጡም, ይህም ለየት ያለ የድምፅ ተፅእኖ ሊፈጠር ይችላል (ሠንጠረዥ 3).
ሠንጠረዥ 3. ለተለያዩ የእንጉዳይ ዓይነቶች የሙከራ ስርዓቱን ማረጋገጥ
የእንጉዳይ ስም | የመነሻ ዑደት |
ኮሌቶትሪክስ ኮከዶች 1 | 20.9 |
ሐ. ኮከዶች 2 | 22.6 |
ሐ. ኮከዶች 3 | 23 |
ሐ. ኮከዶች 4 | 22 |
Fusarium oxysporum | > 40 |
ኤፍ. verticillium | > 40 |
ሪቻዞቶኒያ ሶላኒ | > 40 |
ፎሞፕሲስ ፋሴሎሊ | > 40 |
Alternaria alternata | > 40 |
ኤ. ቲማቲም ፊላ | > 40 |
ሄልሚንቶስፖሪየም ሶላኒ | > 40 |
Phellinus ferrugineovelutinus | > 40 |
Stemphylium vesicarium | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
ክላዶስፖሪየም ክላዶስፖሪዮይድስ | > 40 |
ሐ. ፉሉም | > 40 |
አክሮዶንቲየም ሉዙላ | > 40 |
ፔኒሲለሚ SP. | > 40 |
ማስታወሻ. * በሁሉም ናሙናዎች ውስጥ ያለው የዲኤንኤ መጠን 10 ng ነበር።
የተገነባው የፈተና ስርዓት በቲማቲም ቅጠል ናሙናዎች ውስጥ የሚገኙትን የሲ. ለጥናቱ, በኮስትሮማ, ሞስኮ, ካሉጋ, ኒዝሂ ኖቭጎሮድ ክልሎች ውስጥ የሚበቅሉ የተለያዩ ዝርያዎችን የዘር ሀረጎችን ወስደናል. የ C.coccodes ዲ ኤን ኤ መገኘት በናሙናዎቹ ውስጥ እንደ አስፈላጊነቱ ተቆጥሯል, በምርመራው ውስጥ የመግቢያው ዑደት ከ 35 ያልበለጠ ነው. ሠንጠረዥ 0.05) እና የመነሻ ዑደቶች ከ 33.5 በላይ መሆናቸው ፣ የአንዳንድ ሌሎች የፈንገስ ዝርያዎች ልዩ ያልሆነ ዲ ኤን ኤ ተገኝቷል። በዚህ አቀራረብ ፣ በኮስትሮማ ፣ በሞስኮ ፣ በካሉጋ ክልሎች እና በክራስኖዶር ክልል የየይስክ ክልል (ሠንጠረዥ 2 ፣ 40) ውስጥ በአንድ የቲማቲም ቅጠል ውስጥ በሚበቅሉ 5 የሳንባ ነቀርሳ ናሙናዎች ውስጥ የ C. coccodes ዲ ኤን ኤ መገኘቱ ተገኝቷል ።
ሠንጠረዥ 4. በድንች ቁጥቋጦዎች ላይ የኮሌቶትሪኩም ኮከዶችን መለየት *
የናሙና ቁጥር | የጃፓን ዓይነት | የእድገት ቦታ | C. cocodes ማወቂያ | የመነሻ ዑደት |
---|---|---|---|---|
1 | ቀይ ስካርሌት | Kostroma ክልል | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | ሳንቴ | የሞስኮ ክልል | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhukovsky ቀደም | የሞስኮ ክልል | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | ሞሊ | Kaluga ክልል | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | ምናባዊ። | Kaluga ክልል | - | |
15 | ገላ | የኒዝሂ ኖቭጎሮድ ክልል. | - | |
16 | - |
ማስታወሻ. * በሁሉም ናሙናዎች ውስጥ ያለው የዲኤንኤ መጠን 50 ng ነበር።
ሠንጠረዥ 5. በቲማቲም ቅጠሎች ላይ የኮሌቶትሪኩም ኮከዶችን መለየት *
የናሙና ቁጥር | የእድገት ቦታ | C. cocodes ማወቂያ | የመነሻ ዑደት |
---|---|---|---|
1 | ክራስኖዶር ግዛት፣ ክራይሚያ አውራጃ | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | የክራስኖዶር ግዛት፣ የዪስክ ወረዳ | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* በሁሉም ናሙናዎች ውስጥ ያለው የዲኤንኤ መጠን 50 ng ነበር።
በእኛ የተፈጠረው የፈተና ስርዓት በብሪቲሽ ተመራማሪዎች (Cullen et al., 2002) በስሜታዊነት እና በልዩነት ከተሻሻለው ያነሰ አይደለም እና ለዕፅዋት ናሙናዎች ትንተና ተስማሚ ነው። የዘር ሀረጎችን ለመተንተን ያቀረበው ማመልከቻ ውጫዊ የጉዳት ምልክቶች ሳይታይባቸው በሳንባዎች ውስጥ የሚገኘውን C.cocodes ዲ ኤን ኤ ለመለየት እና ቅጠሎችን በተሳካ ሁኔታ ለመተንተን አስችሏል.
እስከዛሬ ድረስ በሩሲያ ውስጥ የሲ. የመጀመሪያው ጥናት እንደሚያሳየው በተለያዩ የሩሲያ ፌዴሬሽን ክልሎች ከሚበቅሉት 16 የተፈተኑ የዘር ሀረጎችና 5ቱ ሲ. ይህ የሚያሳየው የድንች ቱቦዎች ጥቁር ነጠብጣብ በሩሲያ ውስጥ የተለመደ የድንች በሽታ ነው, እና የድንች ሰብሎችን መጠን እና ጥራትን በመቀነስ ረገድ ያለው ሚና ዝቅተኛ ነው.
የቲማቲም ቅጠሎች ትንተና ከየይስክ አውራጃ ክራስኖዶር ግዛት በአንዱ ቅጠል ውስጥ የሲ. ቀደም ሲል በደቡባዊ ሩሲያ የቲማቲሞችን ማሳዎች ሲፈተሽ የብሪቲሽ የሙከራ ስርዓት (ኩለን እና ሌሎች, 2002) ሲ, ኮክዴድ የያዙ ቅጠሎች ተገኝተዋል, እና በአንዳንድ መስኮች በሲ. አል., 2018). በ Krasnodar እና Primorsky Territories, በሞስኮ ክልል ውስጥ የቲማቲ ፍሬዎችን አግኝተናል, ከእነዚህም ውስጥ የሲ. በአሁኑ ጊዜ በሩሲያ ውስጥ በቲማቲም ላይ ሲ ኮክዶች በጣም የተስፋፋ ሲሆን ይህም ጎጂነቱ ዝቅተኛ ነው.
ስለሆነም እስካሁን ድረስ በድንች እና ቲማቲም ላይ የሲ.ኮክድ ስርጭትን በተመለከተ በቂ መረጃ ተከማችቷል.
በድንች እና ቲማቲም በሽታዎች እድገት ውስጥ የዚህን ፈንገስ ሚና በተሻለ ሁኔታ ለመረዳት በሩሲያ ውስጥ ያለውን ስርጭት መከታተል, የአፈር እና የዘር ኢንፌክሽኖች ሚና እና በማከማቻ ወቅት የጥቁር ነጠብጣብ ሚናን ማጥናት አስፈላጊ ነው. የ PCR ምርመራዎችን መጠቀም ይህንን ስራ በእጅጉ ሊያመቻች ይችላል, እና የሁለቱም የሙከራ ስርዓቶች በአንድ ጊዜ ጥቅም ላይ መዋላቸው የትንታኔውን ትክክለኛነት በእጅጉ ይጨምራል.
ይህ ሥራ ከሩሲያ ሳይንስ ፋውንዴሽን ቁጥር 18-76-00009 በተሰጠው እርዳታ ተደግፏል.
ጽሑፉ "Mycology and Phytopathology" በሚለው መጽሔት ላይ ታትሟል (ጥራዝ 54, ቁጥር 1, 2020).